凡是闊葉樹木屑都可以做培養料。配料應注意原料合適的配比、料水比和酸堿度，這些因素影響培養料的理化性質，與木耳菌絲生長發育有直接關系。配方一：鋸木屑78%、稻糠18.5%、黃豆粉2%、石膏粉1%、生石灰0.5%。配方二：鋸木屑86.5％，麥麩10％，豆餅粉2％，生石灰0.5％，石膏粉1％。配方三：鋸木屑78%、麥麩20%、石膏1%、白糖1%。各配方配料含水量60%左右。一般用手捏拌好的培養料，指縫間有水跡，滴水不超過一滴為宜。
培養料最好用拌料機拌料，如果人工拌料，至少要保證“三三”制，也就是說，輔料先拌三遍，主料和輔料混合拌三遍，加水后再拌三遍?；蛘?，先把輔料混合拌勻后，一層主料，一層輔料，混合后進行拌料，正反方向各2-3次就可以了。 培養料加水后，要拌勻，堆悶2小時，讓其水分浸潤濕透，不能混雜有干料，以免影響滅菌效果。
裝袋可選用裝袋機，該機裝料打孔能一次完成，即節省人力，又保證了裝袋的質量。袋一定要選用17×33cm的聚乙烯袋，因聚乙烯袋在低溫時不易破損，質地柔軟，易收縮，袋壁緊貼菌棒上，開口出耳時保濕性能好，噴水時不易使菌袋內積水，減少了出耳期的后期污染。裝料要松緊適度，料松菌絲弱，易衰老，出耳時易污染，料過緊通氣不良，發菌慢。一般每袋填料1.1-1.2公斤。裝料后套上頸圈，壓上蓋。蓋和料面應保持3-5cm空間高度。
